傳代細(xì)胞培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)原理：
傳代細(xì)胞的培養(yǎng)使用已成功構(gòu)建的細(xì)胞株，大量培養(yǎng)狀態(tài)良好的同種細(xì)胞，并維持細(xì)胞種的延續(xù)。傳代培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)操作之一，也是所有細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。傳代細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞的生長習(xí)性可分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)流程：

1.觀察培養(yǎng)基是否正常，細(xì)胞狀態(tài)如何，細(xì)胞密度如何，決定是否傳代。觀察時(shí)擰緊蓋子。
2.加熱PBS、versene、培養(yǎng)基，(提前做好) 瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。
3.打開超凈臺(先開風(fēng)機(jī)，后開照明)，用75%乙醇清潔臺面，點(diǎn)燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如果廢液太多，可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個(gè)，置于架子上。
4.取尖吸管、吸量管各一支，放置在的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。
5.取待傳代的細(xì)胞。打開versene，用酒精燈外焰燒。燒吸管時(shí)距離酒精燈心遠(yuǎn)些，不要把渣滓?guī)нM(jìn)去。把試劑拿入臺子的時(shí)候，盡量平穩(wěn)，不要讓試劑碰到瓶口。
6.用吸量管吸取舊的培養(yǎng)基，置離心管中，吸量管加入versene，然后將versene瓶收起來。(加versene主要是為了將舊培養(yǎng)基洗去)。在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時(shí)都不要對著細(xì)胞。
7.打開胰酶，然后將versene棄掉。換新管，用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶后，盡快放平，使細(xì)胞消化時(shí)間一致。
8.將細(xì)胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打開PBS. 之后拿出來鏡下隨時(shí)觀察。使用二次消化法，去除容器中殘余的細(xì)胞。別忘了用舊培養(yǎng)基中和。
9.取細(xì)胞，鏡下觀察消化情況。消化程度合適之后(細(xì)胞變圓，但不漂起)，用尖吸管棄去胰酶，取離心管中的培養(yǎng)基加入細(xì)胞，吹打，至所有細(xì)胞從培養(yǎng)皿底部脫落下來。用PBS洗細(xì)胞，versene對細(xì)胞有毒性，且不能被血清中和。然后吸取至離心管中，800 rpm離心5分鐘。
10.吸量管吸取適量培養(yǎng)基加入新的培養(yǎng)皿中。
11.細(xì)胞離心畢，用吸新培養(yǎng)基的管棄去上清，先把泡沫吸走。換吸量管吸取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基適量，加入離心管，小體積混勻，將細(xì)胞重懸，尖吸管吹勻。
12.擦計(jì)數(shù)板，用槍吸10ul的液體，計(jì)數(shù)。不要把槍伸到離心管內(nèi)。
13.吸量管吸取細(xì)胞懸液，加入新的培養(yǎng)皿中。鏡下觀察，搖勻，放入37度孵育。收超凈臺。

科研和臨床應(yīng)用：

傳代細(xì)胞細(xì)胞可用于所有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，常用于進(jìn)行細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞侵襲和藥物實(shí)驗(yàn)等多方面的研究。